Margaret Colin, 26 Mayıs 1958 tarihinde Brooklyn, New York'ta dünyaya gelmiştir. İrlanda kökenli Katolik bir ailede büyüyen ve Long Island'da yetişen Colin, Hofstra Üniversitesi'nden mezun olduktan sonra oyunculuk kariyerine adım attı. Profesyonel yaşamına gündüz kuşağı dizileriyle (soap opera) başlayan oyuncu, "The Edge of Night" dizisindeki Heiress Paige Madison ve özellikle "As the World Turns" dizisindeki Margo Hughes karakteriyle televizyon dünyasında ilk tanınırlığını elde etti. Sinemaya geçişi 1980'lerin ortasında, John Hughes'un yazdığı "Pembe" (Pretty in Pink) (1986) ve Jonathan Demme'nin yönettiği "Vahşi Şeyler" (Something Wild) (1986) gibi kült filmlerle oldu. Ancak Margaret Colin'in sinema kariyerindeki ilk büyük ticari başarısı, Tom Selleck, Steve Guttenberg ve Ted Danson ile başrolü paylaştığı, 1987 yılının en çok hasılat yapan filmi "Üç Adam ve Bir Bebek" (Three Men and a Baby) (1987) oldu. Bu filmdeki Rebecca rolü, onun komedi ve drama arasındaki dengeyi kurabilen yetenekli bir oyuncu olarak tanınmasını sağladı. 1990'lar boyunca hem sinemada hem de televizyonda aktif olan Colin, Harrison Ford ve Brad Pitt'in rol aldığı "Sessiz Düşman" (The Devil's Own) (1997) filminde yer aldı. Kariyerinin en büyük gişe rekoru kıran projesi ise, Roland Emmerich'in yönettiği bilimkurgu felaket filmi "Kurtuluş Günü" (Independence Day) (1996) oldu. Bu filmde Jeff Goldblum'un karakterinin eski eşi ve Beyaz Saray İletişim Direktörü Constance Spano'yu canlandırdı. Ayrıca, Adrian Lyne'ın yönettiği ve bu biyografi serisindeki diğer oyuncuların (Richard Gere, Diane Lane) da yer aldığı erotik gerilim filmi "Sadakatsiz" (Unfaithful) (2002) filminde Sally karakterine hayat verdi. Televizyon dünyasında ise modern izleyicinin hafızasına, popüler gençlik draması "Gossip Girl" (2007-2012) dizisinde canlandırdığı Eleanor Waldorf karakteriyle kazındı. Blair Waldorf'un moda tasarımcısı annesi olarak sergilediği sofistike ve zaman zaman mesafeli performans, dizinin en sevilen yan karakterlerinden biri olmasını sağladı. Televizyon kariyerine "Now and Again" (1999-2000), "Veep" ve "Chicago Med" gibi yapımlarla devam eden Colin, aynı zamanda "Jackie" oyununda Jacqueline Kennedy'yi canlandırarak Broadway sahnelerinde de başarısını kanıtlamış çok yönlü bir sanatçıdır.